C/EBPβ通过pim-1介导足细胞损伤的作用机制

摘要：

目的 探讨CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)/丝氨酸/苏氨酸激酶1(pim-1)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)轴介导小鼠肾脏足细胞损伤的作用机制.方法 体外培养及转染足细胞后分为Control组、siRNA-NC组(用siRNA-NC转染足细胞)、siC/EBPβ组(用siC/EBPβ慢病毒转染足细胞)、Vector-NC组(空载体转染足细胞)和pim-1-OE组(pim-1过表达慢病毒转染足细胞).脂多糖(LPS)与腺苷三磷酸(ATP)刺激足细胞后分为LPS+ATP 组、LPS+ATP+siRNA-NC 组、LPS+ATP+siC/EBPβ组、LPS+ATP+siC/EBPβ+Vector-NC组和LPS+ATP+siC/EBPβ+pim-1-OE组.实时荧光定量PCR(qPCR)检测C/EBPβ和pim-1 mRNA水平.Western blot检测C/EBPβ、pim-1、NLRP3、p20半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-1、Gasdermin D(GSDMD)、p17白细胞介素(IL)-1β蛋白水平.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎性因子IL-1β和IL-6水平.染色质免疫共沉淀(chip)实验及双荧光素酶报告基因实验检测C/EBPβ与pim-1基因启动子结合.结果 与Control组和siRNA-NC组相比,siC/EBPβ组的C/EBPβ及pim-1 mRNA水平明显下降(P＜0.01).与Control组相比,LPS+ATP组NLRP3、p20Caspase-1、p 17IL-1β蛋白水平及IL-1β、IL-6水平明显升高(P＜0.01).与 LPS+ATP+siRNA-NC 组相比,LPS+ATP+siC/EBPβ组NLRP3、p20Caspase-1、p17IL-1β蛋白水平及IL-1β、IL-6水平降低(P＜0.01).chip实验及双荧光素酶报告基因实验显示C/EBPβ可与pim-1基因启动子结合.与 Control组和 Vector-NC 组比较,pim-1-OE 组 pim-1 mRNA 水平明显升高(P＜0.05).与 LPS+ATP+siC/EBPβ+Vector-NC 组相比,LPS+ATP+siC/EBPβ+pim-1-OE 组 NLRP3、p20Caspase-1、p17IL-1β、GSDMD 蛋白水平及IL-1β、IL-6水平升高(P＜0.05).结论 C/EBPβ/pim-1/NLRP3轴可能参与足细胞损伤,并作为LN治疗的潜在靶点.

关键词：狼疮肾炎、足细胞、NLR家族、热蛋白结构域包含蛋白3、CCAAT增强子结合蛋白β、原癌基因蛋白质c-pim-1

所属期刊栏目：50

分类号：R593.242(全身性疾病)

资助基金：河南省科技攻关计划202102310054

在线出版日期：2022-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：230-235