槲皮素通过miR-101/EZH2轴介导的EMT途径改善NSCLC吉西他滨耐药的机制研究

摘要：

目的 从微小RNA-101(miR-101)/Zeste基因同源蛋白2(EZH2)轴的角度探究槲皮素逆转非小细胞肺癌(NSCLC)上皮间质转分化(EMT)及吉西他滨(Gb)耐药性的分子机制.方法 用不同浓度槲皮素培养A549及A549/Gb,CCK-8法筛选适宜的槲皮素浓度进行后续试验;取A549细胞分为空白组、A549+EMT诱导剂组、A549+槲皮素组、槲皮素+EMT诱导剂组;A549细胞和A549/Gb分为A549组、A549/Gb组、A549/Gb+槲皮素组、A549/Gb+EMT诱导剂组、miR-101-inhibitor组、槲皮素+miR-101-inhibitor组、miR-NC组;实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组miR-101表达水平;Western blot法检测EZH2、转化生长因子(TGF)-β1、果蝇母亲DPP同源物4(SMAD4)、p-SMAD4和EMT标志蛋白E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;CCK-8法检测各组细胞光密度(OD)值,并计算半数抑制浓度(IC50)及耐药指数(IR).结果 槲皮素对A549及A549/Gb的IC50分别为64、128μmol/L.EMT诱导剂增强A549细胞EMT特性(N-cadherin及Vimentin表达升高,E-cadherin表达降低)后,A549细胞miR-101表达降低,EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表达水平,IC50及IR升高(P<0.05);槲皮素可抑制A549细胞EMT特性、降低IC50及IR,并上调miR-101,抑制EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表达(P<0.05);EMT诱导剂可逆转槲皮素的上述作用(P<0.05).与A549细胞相比,A549/Gb细胞的EMT特性增强,IC50、IR、EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4表达均升高(P<0.05);抑制miR-101或EMT诱导剂处理,均可进一步增强A549/Gb细胞的EMT特性,升高IC50、IR,上调EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表达(P<0.05);槲皮素可抑制A549/Gb细胞的EMT进程、降低其IC50、IR及EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表达(P<0.05);抑制miR-101表达可逆转槲皮素的上述作用(P<0.05).结论 槲皮素可通过上调miR-101,抑制EZH2表达,进而抑制EMT进程,降低NSCLC细胞耐药性.

关键词：槲皮素;癌,非小细胞肺;A549细胞;抗药性,肿瘤;微RNAs;上皮-间质转化;Zeste同源蛋白2增强子;微小RNA-101;吉西他滨

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分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：河南省科技攻关项目182102310314

在线出版日期：2022-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：125-130