IRX5促进肝癌细胞的侵袭迁移及其与miR-136-5p靶向关系的验证

摘要：

目的 探讨易洛魁族同源盒基因5(IRX5)对肝癌细胞侵袭与迁移的影响,并验证其与miR-136-5p的靶向关系.方法 取对数生长期肝癌SMMC7721细胞,过表达IRX5实验设空载质粒(pcDNA3.1)组和过表达IRX5(pcDNA3.1-IRX5)组,敲低IRX5实验设阴性对照(sh-NC)组和敲低IRX5(sh-IRX5)组.采用Western blot验证IRX5过表达和敲低效率;采用划痕实验和Transwell实验检测IRX5对肝癌细胞迁移与侵袭的影响;采用miRanda、Targetscan生物信息学软件预测IRX5结合的miRNA和位点;构建野生型和突变型IRX53′UTR双荧光素酶报告基因质粒,采用酶切、基因测序方法鉴定重组质粒是否构建成功.取对数生长期293T细胞,设野生型质粒+阴性对照(IRX5-3′UTR-Wt+NC)组和野生型质粒+miR-136-5p(IRX5-3′UTR-Wt+miR-136-5p)组,突变型质粒+阴性对照(IRX5-3′UTR-Mut+NC)组和突变型质粒+miR-136-5p(IRX5-3′UTR-Mut+miR-136-5p)组,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性.结果 过表达IRX5组IRX5蛋白表达水平、细胞迁移及侵袭数量均高于空载质粒组,敲低IRX5组IRX5蛋白表达水平、细胞迁移及侵袭数量均低于阴性对照组(均P<0.05).成功构建IRX5基因3′UTR野生型和突变型双荧光素酶报告质粒;双荧光素酶实验结果显示,IRX5-3′UTR-Wt+miR-136-5p组双荧光素酶活性低于IRX5-3′UTR-Wt+NC组(P<0.01),IRX5-3′UTR-Mut+miR-136-5p组与IRX5-3′UTR-Mut+NC组差异无统计学意义.结论 IRX5可促进肝癌细胞的侵袭与迁移,IRX5是miR-136-5p的一个靶基因,miR-136-5p可能通过IRX5的3′UTR抑制肝癌细胞的侵袭与迁移.

关键词：肝肿瘤、细胞运动、肿瘤侵润、双荧光素酶、IRX5、miR-136-5p

所属期刊栏目：48

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：贵州省科技厅项目;贵州省科技厅学术新苗项目;贵州省教育厅青年科技人才成长项目;贵州省高等学校大学生创新创业训练计划项目;贵州医科大学附属医院博士启动基金

在线出版日期：2020-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：358-363