基于双荧光素酶报告基因系统的人源SREBP1基因启动子的活性研究

摘要：

目的 构建固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)启动子双荧光素酶报告基因表达载体,为研究针对SREBP1靶点的天然活性抑制剂筛选奠定基础.方法 利用生物信息学软件,对SREBP1基因5′端上游5000 bp序列进行启动子预测与分析.应用Gibson Assembly方法构建启动子双荧光素酶载体,并将构建成功的pGL3-SREBP1-pro重组质粒和内参质粒pRL-SV40共转染肝癌HepG2细胞并给予天然抑制剂大黄素,检测SREBP1转录活性的抑制效果.结果 SREBP1基因5′端上游2000 bp区域内有启动子特征序列,存在转录因子结合位点;重组质粒经酶切及测序鉴定证实为阳性克隆,瞬时转染肝癌HepG2细胞后经双荧光素酶报告基因系统检测,所克隆的片段序列具有启动子活性,该活性可被大黄素所抑制.结论 成功构建了pGL3-SREBP1-pro双荧光素酶报告基因表达载体,并证实其活性,可为进一步用于针对SREBP1靶点的天然活性抑制剂筛选奠定基础.

关键词：固醇调节元件结合蛋白1、转录启动子、基因、报告、萤光素酶类、大黄素、蒽醌类、生物信息学

所属期刊栏目：47

分类号：R349.64(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金面上项目81874356;湖北省卫健委重点项目WJ2017Z023;湖北医药学院自由探索基金资助2018YHKT01;湖北省卫健委中医药科研青年人才项目ZY2019Q004

在线出版日期：2019-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：897-902