miR-200a靶向调控AP-2γ表达抑制神经母细胞瘤SK-N-AS细胞增殖
目的 明确miR-200a具有靶向调控转录因子活化蛋白(AP)-2γ表达而抑制神经母细胞瘤细胞增殖的能力,进一步揭示miR-200a抗瘤的分子机制.方法 通过双荧光素酶报告基因分析检测miR-200a对AP-2γ3'UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-200a模拟物转染神经母细胞瘤细胞,利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)方法检测AP-2γ表达水平的改变;将AP-2γshRNA转染SK-N-AS细胞,MTS细胞增殖活性检测分析干扰AP-2γ表达对神经母细胞瘤细胞增殖能力的影响;将AP-2γ重组质粒与miR-200a模拟物共转染神经母细胞瘤细胞,通过MTS检测细胞增殖能力.结果 miR-200a处理组细胞活性(66.33±5.13)与对照组的(100±0)相比,细胞增殖受到明显抑制(F=114,P<0.05).与未转入的相对荧光素酶活性(0.982±0.119)相比,miR-200a转染明显抑制AP-2γ的3'UTR驱动的荧光素酶活性(0.624±0.051).且miR-200a模拟物明显降低神经母细胞瘤细胞中AP-2γ的mRNA和蛋白表达水平;此外,与对照组相比,shRNA干扰AP-2γ表达能明显抑制SK-N-AS细胞的增殖(62.5±2.4),它能部分模拟miR-200a的抑制增殖能力.最后,发现过表达AP-2γ能部分逆转miR-200a对SK-N-AS细胞的增殖抑制作用(92.4±1.4).结论 miR-200a通过靶向下调AP-2γ表达而抑制神经母细胞瘤细胞的增殖.
神经母细胞瘤、微RNAs、细胞增殖、AP-2γ、miR-200a
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R748(神经病学与精神病学)
湖南省教育厅课题13C802
2016-03-31(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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