甲基化调节miR-200b的表达及其对胃癌MGC-803细胞增殖侵袭能力的影响

摘要：

目的：体外研究基因miR-200b发生甲基化的不同程度及其表达量的差异对胃癌细胞MGC-803增殖、侵袭、凋亡及对上皮间质转化的影响。方法以正常胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞MGC-803为研究对象，提取细胞总RNA，逆转录后进行实时荧光定量PCR检测2种细胞系中miR-200b的表达量；亚硫酸氢钠修饰PCR（BSP）法检测miR-200b启动子区甲基化水平。用不同浓度5-氮杂胞苷（5′-Aza-CdR）药物处理MGC-803细胞72 h后，同法检测miR-200b的表达量及启动子区甲基化水平变化。根据上述实验结果选择合适的药物作用浓度和时间即（10μmol/L，72 h）作为处理组。通过Transwell侵袭实验观测细胞侵袭能力；流式细胞技术检测细胞周期及凋亡的分布情况；Western-blot 检测上皮间质转化（EMT）相关指标E-cadherin、N-cadherin、ZEB1、Slug、基质金属蛋白酶（MMP）9等的表达水平。结果 miR-200b在GES-1中表达量较MGC-803高（P=0.022）。启动子区甲基化水平则与之相反（P=0.034）。药物不同浓度作用后的MGC-803细胞系miR-200b表达量有随浓度升高而升高的趋势，作用浓度为10μmol/L时miR-200b启动子区甲基化水平较对照组低（P=0.043）。与对照组相比，处理组细胞晚期凋亡数增多；G0/G1期细胞数显著增多，S期显著减少；穿过Transwell小室细胞数显著减少；Western-blot实验表明E-cad?herin表达量升高，N-cadherin、ZEB1、Slug、MMP9表达量降低。结论 miR-200b启动子区甲基化程度的不同可以影响其表达量，而miR-200b表达量的异常又与胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭能力密切相关。

关键词：胃肿瘤、腺癌、细胞凋亡、细胞增殖、DNA甲基化、微RNA-200b

分类号：R735.2;R349.6(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81172356；天津市自然科学基金重点项目10JCZDJC18500

在线出版日期：2015-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：340-343,344