Notch1（NICD）过表达真核载体构建及对大鼠BMSCs增殖分化的影响

摘要：

目的：探讨过表达Notch1(NICD)基因对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖分化的影响。方法构建Notch1(NICD)过表达真核载体，实验分正常对照组（CON组，不做转染）、阳性对照组（空载体组，将质粒pEGFP-N1转染BMSCs）和转染组（将重组质粒pEGFP-N1-NICD转染BMSCs）。转染48 h后观察细胞一般状态，Real-time PCR和Western blotting检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和Notch1基因和蛋白表达，流式检测转染后细胞凋亡、细胞周期，MTT检测细胞增殖情况。结果重组质粒pEGFP-N1-NICD编码序列与设计完全一致。转染组和空载体组BMSCs均可表达绿色荧光。转染组GFAP、Notch1的基因和蛋白表达均高于CON组和空载体组（均P＜0.05），空载体组与CON组差异无统计学意义；各组间NSE的基因和蛋白表达差异无统计学意义。转染组存活细胞比率低于CON组和空载体组，早期细胞凋亡比率、晚期细胞凋亡比率均高于CON组和空载体组；空载体组晚期细胞凋亡比率高于CON组。转染组细胞处于G1/G0期的比例高于CON组和空载体组，处于S期和G2/M期的比例低于CON组和空载体组（均P＜0.05）。除转染1 d时各组MTT A490值差异无统计学意义外，其余时点转染组MTT A490值均低于CON组和空载体组（均P＜0.05）。结论高表达Notch1(NICD)基因可能在一定程度上诱导BMSCs凋亡、抑制其增殖，且表现诱导向神经胶质样细胞分化。

关键词：细胞增殖、细胞分化、转染、神经胶质原纤维酸性蛋白质、磷酸丙酮酸水合酶、Notch信号通路、骨髓间充质干细胞、诱导、Notch1(NICD)

分类号：R349.5(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金面上项目31170930；辽宁省科技厅自然科学基金计划项目2013022059；辽宁医学院青年科技启动基金项目Y2011Z010

在线出版日期：2014-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：883-888