PKH26荧光标记牛尾髓核细胞的实验研究

摘要：

目的：探讨PKH26荧光标记在牛尾髓核细胞的应用，为髓核组织工程的体内研究提供可示踪的种子细胞。方法从牛尾椎间盘中分离髓核组织，通过酶消化法获取原代细胞，倒置显微镜下观察，P1代髓核细胞进行番红O、甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色，对P1代髓核细胞进行PKH26荧光染料标记，并对标记后细胞的活性、荧光强度（0、14、28 d）、增殖特性及基因表达进行评估。结果分离得到的髓核细胞数为（1.56±0.35）×106/g，倒置显微镜下，原代细胞培养4 d开始贴壁，细胞成群生长，14 d铺满瓶底，原代细胞、P1代细胞均呈类软骨样细胞形态；P1代髓核细胞甲苯胺蓝染色异染、番红O染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色阳性；PKH26标记前后细胞活性均在95%以上，1、14、28 d呈递减趋势，但28 d时细胞仍可检测出较强的荧光，标记后的细胞增殖及基因表达（Ⅰ、Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖）与标记前的细胞相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论牛尾髓核组织中可以分离出数量满意的髓核细胞，且具有软骨样细胞的表型，可以用作种子细胞；PKH26标记后的髓核细胞无生物学特性的变化，可以用作髓核细胞体内研究的示踪染料。

关键词：组织工程、椎间盘、牛尾、髓核细胞、PKH26

分类号：R329-33;R349.89(人体形态学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81272046,31300798,31000432；中国博士后科学基金项目2011M500530,2012T50221；天津市卫生局科技基金2013KR16

在线出版日期：2014-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：849-852