慢病毒载体介导apelin基因转染人脐带间充质干细胞的实验研究

摘要：

目的构建带有荧光标记基因增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和apelin基因的重组质粒pUbi-apelin-FLAG-pSV40-EGFP并进行慢病毒包装，探讨其转染人脐带间充质干细胞的最佳感染复数（MOI）值及目的基因表达情况。方法化学合成目的基因片段并扩增。采用In-Fusion技术将酶切后的目的基因片段与线性质粒载体连接，转化入感受态DH5α细胞中后筛选阳性克隆并进行测序。重组质粒慢病毒载体转染293T细胞，包装慢病毒并测定滴度。将重组质粒慢病毒按不同MOI值转染人脐带间充质干细胞，根据转染效率得到最佳MOI值，并采用Real-time-PCR及Western blot方法检测目的基因表达情况。结果通过PCR扩增获得酶切位点碱基修饰后的大小约284 bp的目的基因片段，与慢病毒质粒载体连接后形成pUbi-apelin-FLAG-pSV40-EGFP重组质粒，测序结果与预期完全符合，并成功包装慢病毒颗粒。最佳MOI值为20，转染效率为（90.32±3.61）%。慢病毒载体能高效转染人脐带间充质干细胞且2周内持续稳定上调目的基因mRNA及蛋白的表达。结论重组质粒慢病毒载体pUbi-apelin-FLAG-pSV40-EGFP可有效转染人脐带间充质干细胞，并可持续高表达apelin基因。

关键词：间质干细胞、慢病毒属、遗传载体、转染、基因表达、apelin

分类号：S85;R37

资助基金：国家自然科学基金面上项目项目编号81170094

在线出版日期：2013-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1137-1141