双启动子shRNA表达载体对hTERT和bcl-2基因表达的抑制作用

摘要：

目的:研究双启动子shRNA表达载体对人端粒酶蛋白催化亚单位(hTERT)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)基因表达的抑制作用.方法:分别从构建好的大肠杆菌DH5α菌体中提取含有双启动子shRNA的表达载体pdPRO-TB、单启动子对照pdPRO-T、pdPRO-B和阴性对照质粒pdPRO,通过脂质体介导瞬时转染Hela细胞,倒置显微镜下观察细胞形态.实时荧光定量RCR检测hTERT和bcl-2基因的表达水平.结果:4种菌体中均提取出5 000 bp左右的质粒,分别转染Hela细胞48 h后,可见转染pdPRO的Hela细胞形态无明显变化,转染pdPRO-T和pdPRO-B的Hela细胞有部分悬浮,转染pdPRO-TB的Hela细胞有大量悬浮.各载体质粒构建均成功,各目的基因相对管家基因的含量:T(hTERT)=39.8％,B(hTERT)=107.9％,TB(hTERT) =32.1％;T(bcl-2)=91.4％,B(bcl-2)=35.4％,TB(bcl-2)=31.4％.结论:双启动子shRNA表达载体构建成功,可同时抑制hTERT和bcl-2基因的表达.

关键词：端粒、末端转移酶、基因、bcl-2、转染、HeLa细胞、shRNA

所属期刊栏目：40

分类号：R73;X17

资助基金：国家自然科学基金资助项目30571617

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：480-482,后插3