10.3969/j.issn.0253-9896.2011.09.013
靶向人乳头瘤病毒18E6的短发夹结构RNA慢病毒载体的构建
目的:构建含有靶向人乳头瘤病毒18型E6癌基因(HPV18E6)的短发夹结构RNA(shRNA)的慢病毒载体.方法:根据HPV18E6癌基因的相关信息,设计并合成shRNA干扰序列,连人pGCSIL-GFP质粒,构建并鉴定含有shRNA的重组质粒pGC-shRNA;将重组质粒pGC-shRNA和病毒包装质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,进行病毒包装,收集病毒液并进行浓缩、纯化;所得病毒液感染293T细胞,测定病毒滴度,并验证其对宫颈癌HeLa细胞HPV18E6癌基因的干扰效果.结果:HPVISE6的shRNA干扰序列与人类基因组没有同源性,此插入序列转录后得到的RNA二级结构能形成发夹状结构;重组质粒pGC-shRNA经PCR鉴定及DNA测序结果显示该重组质粒构建成功;成功对病毒进行包装、浓缩及纯化后,所得病毒滴度为3×108TU/mL,并能很好地抑制HPV18E6癌基因的表达.结论:成功构建了HPV 18E6-RNAi-LV慢病毒载体,为后续RNA干扰研究的开展提供了工具.
人乳头瘤病毒18、癌基因、RNA干扰、质粒、转染、HeLa细胞、逆转录聚合酶链反应
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Q78;R98
2011-11-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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