Prestin蛋白的稳定高表达卵巢细胞株的建立

摘要：

建立体外稳定高表达耳蜗外毛细胞马达蛋白(prestin)的多克隆中国仓鼠卵巢细胞株(CHO).方法:采用prestin质粒转染CHO细胞进行表达,高浓度博来霉素400～800mg/L筛选出多克隆细胞株,传代培养,同时长时间维持低浓度抗生素(200～400 mg/L).收集所筛选的多克隆细胞株,提取总RNA,采用针对prestin蛋白不同片段设计的3对引物,进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),对扩增产物进行凝胶电泳分析.采用免疫荧光染色方法鉴定所筛选多克隆细胞株的prestin蛋白表达.结果:采用3对不同的prestin引物的RT-PCR结果均为阳性,而对照组则为阴性；利用prestin蛋白的特异性抗体,对所筛选的多克隆细胞株进行免疫荧光染色鉴定结果显示阳性率＞90％.结论:成功获得稳定高表达prestin蛋白的多克隆CHO细胞株,转染表达率高.

关键词：CHO细胞、分子马达蛋白质类、耳蜗、毛细胞、听觉、外、质粒、转染、逆转录聚合酶链反应、荧光免疫测定

所属期刊栏目：39

分类号：R73;TH7

资助基金：辽宁省教育厅科学技术研究项目基金资助项目L2010267

在线出版日期：2011-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：625-627