大鼠Smad 7基因真核表达质粒的构建与鉴定

摘要：

目的:构建并鉴定大鼠Smad 7/pcDNA3.1(+)真核表达质粒,为进一步研究Smad 7的抗肝纤维化作用提供实验基础.方法:TRIzol法抽提大鼠肝组织总RNA,琼脂糖凝胶电泳检测其完整性,紫外分光核酸蛋白分析仪测定其浓度与纯度,两步法获取大鼠Smad 7 cDNA片段,CaCl2法制备感受态细胞,应用EcoRl及XhoI在pcDNA3.1(+)多克隆位点处进行双酶切,切胶回收载体及目的片段酶切产物,将回收的线性化pcDNA3.1(+)与Smad 7 cDNA连接,构建Smad 7/pcDNA3.1(+)重组质粒,转化DH5α大肠杆菌,测序鉴定双酶切证实的阳性克隆.结果:电泳检测RNA的完整性良好,28S约为18S的2倍A260/A280=1.986,纯度较好,阳性克隆酶切后电泳检测在DNA Marker 1.3 kb处见Smad 7目的片段,5.4 kb处见线性化pcDNA3.1(+),与预期结果相符,质粒重组成功,并测序证实.结论:大鼠Smad 7真核表达质粒构建成功,为进一步单独或联合其他质粒从TGF-β/SMAD信号传导的不同环节干预肝纤维化提供了实验基础.

关键词：质粒、DNA结合蛋白质类、肝硬化、克隆、生物、大鼠

所属期刊栏目：36

分类号：R92;R57

资助基金：兵团博士资金资助项目05JC08

在线出版日期：2009-02-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：891-893