人脂联素基因的原核表达、纯化及活性检测

摘要：

目的:在大肠杆菌中表达具有活性的重组人脂联素蛋白.方法:利用PCR技术扩增人脂联素基因完全编码序列,选用Gateway原核表达体系,经过BP反应、LR反应两步反应,将PCR产物克隆入pET-DEST42质粒,构建融合表达载体pET-DEST42/attB-adiponectin,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达脂联素融合蛋白,经镍柱亲和层析纯化,NDSB201高效复性后,使重组蛋白作用于体外培养的肝细胞,RT-PCR法检测重组脂联素对肝细胞葡萄糖-6-磷酸酶转录水平的影响.结果:成功构建了表达载体pET-DEST42/attBadiponectin,DNA序列测定结果与预期一致.IPTG诱导表达的融合蛋白经纯化后Western Blot鉴定具有人脂联素抗原性,并可使培养的肝细胞中葡萄糖-6-磷酸酶转录水平下降.结论:获得具有生物学活性的重组人脂联素为进一步研究脂联素的生理机制奠定了基础.

关键词：脂联素、克隆、分子、基因表达、肝细胞、重组蛋白质类、葡糖-6-磷酸酶、大肠杆菌

所属期刊栏目：35

分类号：R9(药学)

资助基金：天津市自然科学基金043609211

在线出版日期：2007-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：644-646