基于重组PCR法构建人骨保护素N端的酵母表达载体

摘要：

目的:构建骨保护素(OPG)N端片段的酵母表达载体.方法:OPGN端D1-D4域仅由2个外显子编码.以人基因组DNA为模板,PCR分别扩增外显子2和外显子3,并使外显子2的3'引物和外显子3的5'引物具有相互重叠的一段序列.以2种PCR产物混合物为模板,采用重组PCR扩增OPG N端编码序列,拟插入酵母分泌型表达载体pPIC9K.为使未来分泌表达产物具有完全正确的N末端,再次采用重组PCR策略,将pPIC9K信号肽裂解位点前的一段序列(含单一限制酶位点BamHⅠ)与OPG N端编码序列拼接在一起,从BamHⅠ和EcoRⅠ位点插入pPIC9K.结果:得到了OPG N端酵母表达载体,测序证实插入序列正确.结论:重组载体的获得为基因工程研制具有生物活性的OPG N端片段奠定了基础.

关键词：破骨细胞、成骨细胞、聚合酶链反应、克隆、分子、DNA、重组

所属期刊栏目：34

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30300171;天津市自然科学基金043606811

在线出版日期：2006-12-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：753-755