治疗性双质粒HBV DNA疫苗的体外转染表达与鉴定

摘要：

目的:探讨治疗性双质粒HBVDNA疫苗转染COS-7细胞后目的基因的表达情况.方法:以脂质体转染试剂Lipofectamine TM 2000介导,将带有preS2+S基因的重组疫苗质粒pS2.S和带有hIL2+hIFNγ融合基因的重组佐剂质粒pFP分别转染COS-7细胞,同时设立空质粒转染和未转染细胞为对照组,于转染后24,48,72,96 h采用ELISA法检测细胞培养上清的HBsAg、融合蛋白白细胞介素(IL-2)及干扰素(IFN-γ)的表达,并测定融合蛋白的IL-2、IFN-γ活性,采用ECL Western blotting分析和鉴定目的蛋白preS2+S、IL-2及IFN-γ的分子质量大小.结果:双质粒在转染COS-7细胞后不同时间均可进行分泌表达,且48 h时目的蛋白的表达量达峰值,其中表达的融合蛋白具有较高的IL-2和IFN-γ的生物学活性,pS2.S和pFP的转染上清分别在30.6 ku和110 ku处有特异性阳性反应条带.结论:HBVDNA疫苗质粒pS2.S和佐剂质粒pFP在COS-7细胞的最佳表达时间是转染后48 h,并鉴定双质粒表达产物的分子质量大小分别为30.6 ku和110 ku.

关键词：肝炎疫苗、乙型、疫苗、DNA、转染、质粒

所属期刊栏目：34

分类号：R4(临床医学)

资助基金：国家科技攻关项目2002AA223317

在线出版日期：2006-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：145-147