高效化学转化菌内同源重组法构建重组腺病毒

摘要：

目的:对细菌内同源重组法构建重组腺病毒AdEasy系统加以改进,为制备具有更高抗肿瘤疗效的生物治疗制剂奠定基础.方法:将自杀基因CD和HSV-TK插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中,PmeⅠ酶切后,用酚:氯仿抽提、乙醇沉淀或切胶回收纯化;分别采用电穿孔转化法和化学转化法将线性穿梭质粒(pAdTrackCMV-CDglyTK)与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌内实现同源重组;将重组腺病毒质粒rpAdEasyGFP-CDglyTK以脂质体介导至293细胞中进行包装、扩增.结果:采用切胶回收化学转化法获得阳性重组率最高(100%).经PCR、酶切以及测序等方法鉴定,证实融合自杀基因已成功插入腺病毒中.结论:对细菌内同源重组法构建重组腺病毒的方法进行了改进,在降低实验成本的同时获得了较原法更高的阳性重组率,并成功构建了复制缺陷性重组腺病毒rAd-CDglyTK.

关键词：胸苷激酶、胞嘧啶脱氨酶、腺病毒科、肿瘤、基因治疗

所属期刊栏目：33

分类号：R3(基础医学)

资助基金：天津市卫生局资助项目99KY047

在线出版日期：2006-02-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：437-440