犬附红细胞体PGK的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备

摘要：

为了原核表达、纯化犬附红细胞体磷酸甘油酸激酶(PGK),并制备多克隆抗体,本试验从NCBI中已公布的犬附红细胞体(Mycoplasma haemocanis)全基因组序列中,调取其磷酸甘油酸激酶(PGK)的基因序列,并选用原核生物偏爱的密码子优化基因序列,化学合成全新的基因序列pgk,插入质粒pET32a(+)中,构建重组表达质粒pET32a(+)-pgk,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达,利用Western-blot方法检测表达产物,表达产物经镍离子亲和层析纯化后免疫昆明小鼠,获得鼠抗犬附红细胞体PGK多克隆抗体,并利用间接ELISA法检测血清抗体效价.结果表明:成功构建了pET32a(+)-pgk原核表达载体,并在BL21中得以诱导表达,重组蛋白相对分子质量约为60 ku,在包涵体和上清中均有表达,经镍离子亲和层析获得了纯度较高的目的蛋白,利用纯化后的蛋白所制备的鼠抗血清效价可达1∶51 200.

关键词：犬附红细胞体、磷酸甘油酸激酶、原核表达、纯化、多克隆抗体

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分类号：S852.62(动物医学（兽医学）)

资助基金：天津农学院科学研究发展基金项目2014N10;国家自然科学基金项目31702223;天津农学院附属动物医院委托项目科经第2018.96号

在线出版日期：2018-12-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：42-46