乳腺珠蛋白基因的克隆及重组蛋白的表达和纯化

摘要：

目的克隆人乳腺珠蛋白(hMaM)基因,获得高纯度hMaM重组蛋白.方法从人乳腺癌组织提取总RNA,逆转录合成cDNA,设计特异引物,用PCR方法扩增获得目的片段,利用T/A克隆将PCR产物插入pMD-18T载体.利用BamHI+XhoI双酶切方法将目的基因导入表达载体,阳性质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导获得重组蛋白,并用His-SelectTM和Sephadex-G100进行纯化.结果用RT-PCR方法获得279 bp的片段,克隆至T载体后经DNA测序,结果与预期序列一致.表达质粒转化大肠杆菌后经诱导获得27 kD的目的蛋白,与预期分子质量一致.表达产物最终纯化为一条带.结论成功克隆hMaM基因,并获得高纯度重组蛋白,为hMaM的深入研究打下基础.

关键词：乳腺珠蛋白、乳腺癌、克隆、表达

所属期刊栏目：34

分类号：Q78;R737.9(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2006-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：71-75