人Ⅰ型干扰素受体亚基稳定表达真核细胞的筛选及鉴定

摘要：

目的:筛选及鉴定人Ⅰ型干扰素受体亚基(IFNAR1)稳定表达真核细胞.方法:体外扩增IFNAR1基因片段,将双酶切后扩增片段和pcDNA3.1(+)连接构建重组质粒pcDNA3.1-IFNAR1,转化BL21感受态细菌培养,提取重组质粒行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定.重组质粒pcDNA3.1-IFNAR1转染肝癌细胞系HepG2,新霉素筛选挑取阳性克隆细胞,蛋白质印迹试验(Western blotting)分析阳性细胞IFNAR1表达水平.结果:经双酶切和测序验证pcDNA3.1-IFNAR1重组质粒构建成功.pcDNA3.1-IFNAR1转染HepG2经新霉素筛选后获得稳定表达细胞系,蛋白质印迹试验(Westem blotting)证实这些细胞具有较好蛋白表达水平.结论:体外成功构建不同IFNAR1稳定表达水平的HepG2细胞.

关键词：人Ⅰ型干扰素受体亚基、IFNAR1基因、重组质粒、稳定表达、真核细胞

所属期刊栏目：25

分类号：Q756(分子遗传学)

资助基金：深圳市科技创新委员会重点学科经费课题JCYJ20130402151227167

在线出版日期：2015-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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