人可溶性TRAIL原核表达载体的构建和蛋白表达、纯化及活性鉴定

摘要：

目的 建立高效表达可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白的原核表达载体,获得高生物学活性的TRAIL蛋白.方法 取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增TRAIL基因的胞外区片段,克隆入原核表达载体pET30a中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆.重组载体转化感受态细胞BL21,优化蛋白表达条件；亲和层析法纯化重组蛋白；SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot鉴定.重组蛋白与TRAIL蛋白标准品分别作用Huh-7细胞,CCK8、流式细胞术检测蛋白生物学作用.结果 DNA测序结果证实成功构建重组质粒pET30a/TRAIL,SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot显示pET30a/TRAIL诱导的为可溶性的His-rTRAIL.CCK8、流式细胞术检测结果显示,与TRAIL蛋白标准品相比,His-rTRAIL对Huh-7细胞具有良好的促凋亡作用.结论 成功构建高效表达可溶性TRAIL蛋白的原核表达载体pET30a/TRAIL,表达的可溶性蛋白His-rTRAIL具有高度的生物学作用,为肿瘤的生物学治疗提供新的实验依据.

关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、克隆、原核表达、凋亡

所属期刊栏目：32

分类号：R730.51;Q78(肿瘤学)

资助基金：江苏省高校自然科学基金10KJD310002

在线出版日期：2012-12-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：629-633,673