Rac1及其突变体重组腺病毒载体的构建与鉴定
目的 构建大鼠Rac1及其突变体Rac1Q61L、Rac1G12V、Rac1T17N腺病毒表达载体,并制备出病毒,为进一步研究Rac1在间充质干细胞(MSCs)迁移中的作用奠定基础.方法 以pMD-19-T-Rac1、pMD-19-T-Rac1Q61L、pMD-19-T-Rac1G12V、pMD-19-T-Rac1T17N为模板,扩增Rac1及其突变体Rac1Q61L、Rac1G12V、Rac1T17N,酶切连接到带有GFP标记的pAdTrack-CMV上,PmeI线性化重组质粒pAdTrack-CMV-Rac1及其突变体重组质粒,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒载体,经PacI线性化后转染QBI-293A细胞包装病毒,收获腺病毒重组病毒子,检测病毒滴度并进行间充质干细胞病毒感染复数的鉴定.结果 测序结果显示,Rac1及其突变体Rac1 Q61L、Rac1G12V、Rac1T17N序列正确,成功包装出重组病毒子后经2～3次扩增得到约为107 pfu/ml高效价重组病毒子,感染间充质干细胞后发现150 MOI为最适病毒感染复数.结论 成功构建了Rac1及其突变体重组腺病毒载体pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-Rac1、pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-Rac1Q61L、pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-Rac1G12V、pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-Rac1T17N,获得了Rac1重组病毒子Ad-Rac1、Ad-Rac1Q61L、Ad-Rac1G12V、Ad-Rac1T17N.
Rac1、腺病毒载体、构建、鉴定
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R394.3
国家自然科学基金资助项目30671041;30870642;31071220;江苏省高校自然科学重大基础研究项目06KJA18025;江苏省自然科学基金资助项目BK2009119
2012-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
494-498,509
