人IL-17F重组逆转录病毒载体的构建及其在293T细胞中的稳定表达

摘要：

目的 构建hIL-17F重组逆转录病毒载体并研究它在293T细胞中的表达.方法 以测序验证的pUCm-T/hIL-17F为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因片段(包括20aa信号肽序列,而且hIL-17F基因内EcoR I酶切位点GAATTC→GAACTC同义点突变,即AAT→AAC,均为Asn),并正向插入逆转录病毒载体pSIV-1 后经PCR、双酶切和测序鉴定.将构建正确的pSIV-1/hIL-17F与辅助病毒载体pHIT456和pHIT60混合后,采用脂质体法共转染293T包装细胞,获得具有感染能力的成熟重组逆转录病毒感染293T细胞,经G418筛选获得阳性细胞株,并应用PCR、RT-PCR和dot-ELISA法检测hIL-17F目的基因在293T细胞中的整合、转录和表达.结果 成功构建了hIL-17F基因内EcoRI酶切位点GAA TTC→GAA CTC同义点突变的重组逆转录病毒载体pSIV-1/hIL-17F,并在293T细胞中稳定表达.结论 以逆转录病毒为载体感染的稳定表达rhIL-17F的293T转基因细胞株的首次获得,为进一步研究hIL-17F的生物学功能及其机制奠定了良好的基础.

关键词：人白细胞介素-17F、逆转录病毒、293T细胞、稳定表达

所属期刊栏目：27

分类号：R392-33

在线出版日期：2007-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：185-188