Mer免疫球蛋白样区原核蛋白表达和单克隆抗体制备

摘要：

目的 利用原核蛋白表达载体,体外表达Mer的IgG样区,并利用此重组蛋白制备抗Mer的单克隆抗体.方法 从K562细胞中抽提总RNA,利用RT-PCR扩增Mer的IgG样区片断.经过测序将所得片断与PQE30原核表达载体连接并转化到大肠杆菌M15中,挑选阳性克隆,经诱导和纯化后获得原核蛋白.利用所得的重组蛋白免疫Balb/e小鼠,取其脾脏和小鼠杂交瘤细胞融合制备针对Mer的IgG样区的特异性抗体.利用ELISA方法筛选阳性克隆,Westernblot方法进行验证.结果 体外成功表达MerIgG样区的原核蛋白,片断大小经修饰后约为26 kd,表达量占菌体总蛋白的15%,经Ni-NTA agrose柱纯化后得到纯化蛋白并免疫Balb/c小鼠.将小鼠脾脏细胞和杂交瘤细胞融合后得到1株特异性抗MerIgG样区的单克隆抗体--SZ-128,Westernblot显示此单抗可以和表达的重组蛋白和Mer胞外区真核蛋白反应.结论 成功制备1株抗MerIgG样区的特异性单克隆抗体,为研究Mer的功能提供了有力的工具.

关键词：Mer、IgG样区、原核表达、单克隆抗体

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分类号：R392.2

资助基金：江苏省卫生厅135重点学科开放课题135XY0603;苏州大学欧莱雅医学发展基金EE122522;苏州大学优秀博士论文资助项目23320624

在线出版日期：2007-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：4-7