mIL-10重组复制缺陷型腺病毒载体的构建及制备

摘要：

目的 构建小鼠白介素-10(mIL-10)重组腺病毒真核表达载体,为其体外表达及动物体内试验研究提供依据.方法 以pORF5-mIL-10质粒为模板通过PCR方法扩增回收mIL-10,将其定向连接到腺病毒载体pSGCMV中,构建pSGCMV-mIL10质粒.此质粒与5型腺病毒质粒pBGHE3通过Lipofectamine 2000共转染至293细胞,经同源重组产生重组复制缺陷型腺病毒Ad5-mIL-10.纯化后Ad5-mIL-10在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测定其滴度.结果 扩增所得mIL-10经酶切鉴定、PCR扩增、DNA测序均证实为小鼠白介素-10,重组腺病毒Ad5-mIL-10经PCR鉴定正确,滴度达2.5×1010pfu/ml.结论 成功构建了Ad5-mIL-10重组腺病毒载体系统,为研究IL-10在临床移植中的免疫学作用及基因治疗奠定基础.

关键词：白介素-10、腺病毒

所属期刊栏目：26

分类号：R392.12

资助基金：卫生部科研项目WKJ2004-2-005;苏州大学附属第一医院血液病学学科"135工程"重点学科开放课题基金135XY0608

在线出版日期：2007-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：919-922