人源化抗体构建过程中假链的产生及应对策略

摘要：

目的 在人源化抗体构建过程中,采用方便、快捷的分子克隆手段,消除SP2/0内源性畸形轻链转录本以获得正确的轻链cDNA.方法 在mRNA抽提时,不用常规的TRIZOI法抽提总RNA,而采用经腹腔培养,生长状态良好的杂交瘤细胞,用QIAGEN公司Oligotex Direct mRNA Purification Kit,将polyA+的mRNA富集.可有效减少畸变转录本的含量,提高功能型mRNA的丰度.利用polyA+RNA,采用RT-PCR,我们成功地克隆到了轻链可变区序列,序列分析证实读码框完全正确,属于轻链可变区基因.结果 NCBI数据库BLAST显示,克隆的基因序列符合小鼠Ig可变区特征,具有正确的CDR和FR功能区及VJ连接区.结论 采用polyA+mRNA富集技术,成功克隆获得阻断型抗人CD154 mAb(4F1)单克隆抗体的轻链、重链可变区基因,成功地消除了SP2/0内源性畸形转录本对免疫球蛋白功能性轻链基因的影响.

关键词：畸形转录、假基因、杂交瘤

所属期刊栏目：26

分类号：R392.1

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA215341;江苏省自然科学基金BK2001211

在线出版日期：2007-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：911-914