TIMP-2逆转录病毒载体的构建及表达

摘要：

目的构建人组织型基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)编码序列基因逆转录病毒表达载体,转染人单核细胞白血病细胞株,为探讨TIMP-2的生物学功能奠定基础.方法根据基因库中已公布的序列设计引物,用PCR方法扩增出人TIMP-2编码序列基因片段,用限制性内切酶及T4连接酶将目的片段插入MSCV逆转录病毒载体中.采用酶切和PCR鉴定及测序后经脂质体介导转染至PT67包装细胞中,以病毒上清感染单核细胞白血病细胞株SHI-1,G418筛选,极限稀释法挑选单克隆细胞株,定量PCR和Western Blotting检测TIMP-2的表达.结果 TIMP-2基因克隆进逆转录病毒载体MSCV中,经酶切、PCR和DNA测序证实重组逆转录病毒载体构建正确,病毒上清感染SHI-1细胞,经G418筛选并挑选出单克隆细胞,经实时定量PCR和Western Blotting检测发现SHI-1细胞中TIMP-2 mRNA及蛋白表达明显上调.结论成功构建了高表达TIMP-2的SHI-1细胞,可对其生物学行为作进一步研究.

关键词：组织型基质金属蛋白酶抑制剂2、聚合酶链反应、逆转录病毒载体、载体构建、基因转染、基因表达

所属期刊栏目：26

分类号：R392-33;R733.702

资助基金：江苏省卫生厅科研项目H200327

在线出版日期：2006-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：185-187,199