体外分离、培养大鼠脑微血管内皮细胞的若干问题

摘要：

目的建立一种程序简便、经济、获得细胞纯度较高的体外分离、培养大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的方法.方法以SD大鼠为实验材料,采用两步滤过法获得微血管段,胶原酶消化,低分子右旋糖苷密度离心获得BMECs,接种后4 h换液使获得的细胞纯化.倒置显微镜下观察细胞的形态,细胞Ⅷ因子相关抗原(ⅧF-Ag)免疫细胞化学法鉴定细胞及其纯度,通过碱性磷酸酶(AKP)的表达来分析BMECs被微动脉和微静脉污染的程度,通过测定BMECs分泌ET-1的量,鉴定培养的BMECs活力.结果经分离培养获得的BMECs在倒置显微镜下呈多角形或"铺路石"形,单层贴壁生长.培养的细胞Ⅷ因子相关抗原免疫组化试验阳性,细胞纯度为90%.AKP染色阳性细胞百分比为93%,总积分112.原代培养内皮细胞的ET-1含量为388.03 pg/ml,传代后为591.75 pg/ml.结论采用两步滤过法获得脑微血管段,胶原酶消化,低分子量右旋糖苷密度离心可分离和培养大鼠BMECs.该方法较其他方法程序简单,获得细胞纯度高.

关键词：脑微血管内皮细胞、细胞培养、纯度、活力

所属期刊栏目：24

分类号：R329.2;R743(人体形态学)

在线出版日期：2005-01-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：657-660