内皮抑素重组腺病毒载体的构建及制备

摘要：

目的构建鼠源性内皮抑素(mEndostatin)重组腺病毒真核表达载体,为下一步研究其在体外表达及动物实验研究提供基础.方法以mEndostatin质粒为模板通过PCR方法扩增回收mEndostatin,并在其5'端引入M-成瘤蛋白信号肽.将mEndostatin连接到腺病毒载体pCA13中,构建pCA13-mEndo表达质粒.将此表达质粒与腺病毒重组质粒pBGHE3通过Lipofectamine 2000共同转染293细胞,经同源重组产生重组腺病毒Ad-mEndo.纯化后重组腺病毒Ad-mEndo在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化、测定其滴度.结果扩增得到的mEndostatin经酶切鉴定、PCR扩增、DNA测序证实为鼠源性内皮抑素,重组腺病毒Ad-mEndo的滴度为6.3×1010pfu/ml.结论该实验为今后研究重组腺病毒mEndostatin用于恶性肿瘤的基因治疗打下了基础.

关键词：内皮抑素、腺病毒、真核表达

所属期刊栏目：24

分类号：R394.8

资助基金：卫生部科研项目WKJ2004-2-001

在线出版日期：2005-01-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：654-656,680