pcDNA3.0/mbcl-2α真核表达载体的构建及其在L929细胞中的表达与实验研究

摘要：

目的构建重组真核表达载体pcDNA3.0/mbcl-2α,并在L929细胞中稳定表达,研究mbcl-2α基因表达对L929细胞生物学行为的影响.方法用PCR法从含mbcl-2α基因的载体pORF-mbcl-2α获得目的基因片段,正向克隆入真核表达质粒pcDNA3.0中.pcDNA3.0/mbcl-2α以脂质体法转染L929细胞,经G418加压筛选,获得阳性单克隆细胞,用RT-PCR检测克隆细胞中mbcl-2α基因的转录,细胞免疫组化染色法检测蛋白表达.台盼兰拒染法进行活细胞计数,判定细胞增殖速率;MTT比色法测定化疗药物阿霉素对细胞生长的抑制率,并分析药物敏感性.结果构建了重组真核表达载体pcDNA3.0/mbcl-2α,并在L929细胞中稳定表达,获得了可稳定表达mbcl-2α基因的L929细胞株.L929细胞转mbcl-2α基因后,其增殖速率高于对照组,而药物敏感性低于对照组.结论 pcDNA3.0/mbcl-2α在L929细胞中可稳定表达,对L929细胞的增殖和药物敏感性均具有一定的影响,为进一步研究mbcl-2α基因的生物学功能奠定了基础.

关键词：mbcl-2α、基因转染、细胞增殖、MTT、药物敏感性

所属期刊栏目：24

分类号：R394.8

在线出版日期：2005-01-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：602-606