白细胞介素12基因的体外抗结肠癌效应

摘要：

目的构建共表达P35、P40二个亚基的逆转录病毒载体(Rv-mIL12)、建立PA317-mIL12包装细胞系并评估其IL12的生物学活性及经PA317-mIL12作用后淋巴细胞对结肠癌细胞(C26)的体外杀伤作用.方法将经PCR扩增mIL12 p35、p40获取的p35和p40双亚基cDNA片段与经NotI及SalI酶切的逆转录病毒载体(PL-P35-P-P40-SN)DNA在T4噬菌体DNA连接酶作用下进行粘端连接反应.然后将构建的pGCXEXPN-mIL12经电穿孔法转录单嗜性逆转录病毒包装细胞系(PE501),再以其病毒上清加Polybrene感染PA317,筛选出病毒滴度最高的携有mIL12逆转录病毒载体的包装细胞系:PA317-mIL12.采用脾淋巴细胞增殖法检测PA317-mIL12的生物学活性.另外,将PA317-mIL12、淋巴细胞以及人结肠癌细胞(LOVO)按不同浓度比体外共同培养,采用MTT法检测经PA317-mIL12作用后的淋巴细胞对LOVO的杀伤率.结果经筛选的携有mIL12逆转录病毒载体包装细胞系PA317-mIL12的上清mIL12浓度达27ng/(106cells*48 h),其促脾淋巴细胞增殖的生物学活性也与mIL12标准品活性相近,经PA317-mIL12作用后的淋巴细胞体外杀伤试验结果则显示:随着PA317-mIL12浓度的增高,其淋巴细胞对结肠癌细胞杀伤作用也逐渐增强,与对照组相比统计学有显著性差异(P＜0.05).结论 PA137-mIL12体外能有效表达mIL12且具有较好的生物学活性;经PA317-mIL12作用的淋巴细胞对结肠癌细胞的杀伤作用明显提高.

关键词：白细胞介素12基因、结肠癌、抗肿瘤效应

所属期刊栏目：24

分类号：R735.3405(肿瘤学)

在线出版日期：2004-10-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：436-439