人绒毛膜促性腺激素α亚基cDNA克隆、表达及纯化

摘要：

目的从人绒毛膜组织中克隆人绒毛膜促性腺激素α亚基(HCGα)cDNA,构建表达载体并进行了表达、纯化,为进一步研究HCGα在多种肿瘤及异常妊娠中的作用作前期准备.方法提取新鲜人绒毛膜组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增出HCGα cDNA,克隆于表达载体PGEX4T-1,酶切鉴定后测序,测序证实序列正确,并转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达融合蛋白GST- HCGα.超声破菌后上清经谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析纯化,沉淀包涵体经变性、透析复性等处理,用SDS-PAGE电泳、Western印迹分析产物.结果琼脂糖凝胶电泳结果显示RT-PCR扩增片段大小约280 bp,同预计片段相符.SDS-PAGE电泳显示诱导表达的产物经初步处理后有36 kd左右的一条明显新增条带,与预期分子量相符,Western 印迹证实此结果.融合蛋白主要以包涵体形式存在.结论成功地从人绒毛膜组织中克隆出HCGα cDNA,克隆基因在大肠杆菌中获得了较高水平的表达,表达产物有较好的免疫特异性.

关键词：人绒毛膜促性腺激素α亚基、克隆、大肠杆菌、表达

所属期刊栏目：23

分类号：R392.6

在线出版日期：2003-12-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：511-514