10.3969/j.issn.1673-0399.2001.02.003
rhIL-13在毕氏酵母中的表达及生物学活性研究
目的 在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达重组人白介素-13(rhIL-13),便于进一步研究开发。方法 根据酵母对密码子的偏爱性设计并人工合成了人IL-13编码基因片段,经T4DNA连接酶、PCR技术连接形成IL-13 cDNA全长序列;将其插入pPICZαA质粒中,构建成pPICZαA-IL-13表达载体;该载体经SacI线形化后以电转化法导入GS115酵母菌株中,经YPD平板Zeocine抗性筛选获得IL-13表达阳性菌株;用Western Blotting 和ELISA检测发酵上清中IL-13的抗原性和表达量,B9-11细胞株分析其生物学活性。结果 15% SDS-PAGE显示重组人IL-13分子量约13kd,Western-blotting证实为人 IL-13,ELISA测定在摇瓶培养上清表达量达15μg/ml,其生物学活性同标准品一样具有剂量依赖性的刺激B9-11细胞株增殖的作用。结论 成功获得IL-13人工基因和稳定分泌蛋白的基因工程菌株,该重组蛋白的生物学活性达到标准品的要求。
rhIL-13、酵母、表达、生物学活性
21
R392.11
国家自然科学基金39870825;江苏省科技厅自然科学基金13198100
2004-01-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共4页
117-120