rhIL-13在毕氏酵母中的表达及生物学活性研究

摘要：

目的　在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达重组人白介素-13（rhIL-13），便于进一步研究开发。方法　根据酵母对密码子的偏爱性设计并人工合成了人IL-13编码基因片段，经T4DNA连接酶、PCR技术连接形成IL-13 cDNA全长序列；将其插入pPICZαA质粒中，构建成pPICZαA-IL-13表达载体；该载体经SacI线形化后以电转化法导入GS115酵母菌株中，经YPD平板Zeocine抗性筛选获得IL-13表达阳性菌株；用Western Blotting 和ELISA检测发酵上清中IL-13的抗原性和表达量，B9-11细胞株分析其生物学活性。结果　15% SDS-PAGE显示重组人IL-13分子量约13kd，Western-blotting证实为人 IL-13，ELISA测定在摇瓶培养上清表达量达15μg/ml，其生物学活性同标准品一样具有剂量依赖性的刺激B9-11细胞株增殖的作用。结论　成功获得IL-13人工基因和稳定分泌蛋白的基因工程菌株，该重组蛋白的生物学活性达到标准品的要求。

关键词：rhIL-13、酵母、表达、生物学活性

所属期刊栏目：21

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金39870825;江苏省科技厅自然科学基金13198100

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：117-120