10.3969/j.issn.1673-0399.2000.04.013
大肠杆菌表达重组人IL-8分离纯化工艺的建立
目的建立重组人IL-8(rhIL-8)大肠杆菌表达后的高效分离纯化工艺,以便获得高纯度的重组蛋白.方法将已构建好的表达载体转化大肠杆菌HB101,经IPTG诱导进行高效表达.将离心收集到的菌体用超声破壁分离,收集包涵体和胞浆,其中包涵体部分经变性和复性处理后,与胞浆部分合并,进行肝素亲和层析柱分离,再经离子交换柱和凝胶层析柱过滤,得到最终纯品.蛋白纯度用SDS-PAGE鉴定, ELISA法检测重组IL-8含量.检测纯化后重组蛋白的生物学活性和热源质.结果用大肠杆菌HB101表达重组人IL-8,具有较高的表达量(25mg/ml),其分泌的重组蛋白以包涵体和胞浆的形式存在.经多步柱层析纯化后,可获得高纯度的重组IL-8蛋白(纯度>95%).该蛋白在体外具有趋化中性粒细胞游走的作用,兔温法检测热源质含量符合要求.结论大肠杆菌可高效表达rhIL-8,该工艺流程可从大肠杆菌载体中获得具有生物学活性的高纯度rhIL-8.
白细胞介素-8、大肠杆菌、表达、纯化
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R392.11
江苏省科技厅优秀青年教师基金BQ96016;核工业总公司资助项目H741 0262
2004-01-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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