LncRNA AC000061.1调控 CFTR在非梗阻性无精子症发病机制中的作用

摘要：

目的:探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA，LncRNA）AC000061.1调节
CFTR基因表达在非梗阻性无精子症（nonobstructive azoospermia，NOA）发病机制中的作用。
方法:基因芯片检测梗阻性无精子症（obstructive azoospermia，OA）组（50例）、NOA组（50例）及对照组（50例）患者的睾丸组织中差异表达的LncRNA 并对其对应的靶向mRNA进行生物信息学分析，用qRT-PCR和Western blotting法检测三组患者的睾丸组织凋亡基因
Bcl-2表达差异。qRT-PCR验证三组患者睾丸组织、血清、精浆中LncRNA AC000061.1和
CFTR mRNA表达水平。酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清和精浆中CFTR蛋白浓度。构建LncRNA AC000061.1过表达（H-LncRNA组）、沉默（Si-LncRNA组）及空载对照组载体转染至睾丸癌细胞系（NTERA-2），qRT-PCR验证LncRNA AC000061.1及
CFTR mRNA的表达，Western blotting检测CFTR蛋白水平，CCK-8检测细胞增殖能力，流式细胞术及TUNEL凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。
结果:芯片检测和qRT-PCR显示，与对照组相比，NOA组睾丸组织LncRNA AC000061.1和
CFTR表达降低（
P=0.033，
P=0.042），OA组LncRNA AC000061.1表达无差异，
CFTR低表达（
P=0.039）；OA组和NOA组凋亡基因
Bcl-2表达水平依次增高（
P=0.031，
P=0.008）。三组血清中LncRNA AC000061.1 mRNA和
CFTR mRNA及蛋白表达水平差异均无统计学意义（
P均>0.05）。在精浆中，与对照组相比，NOA组和OA组LncRNA AC000061.1和
CFTR mRNA及蛋白含量依次降低（
P=0.002，
P=0.038和
P=0.006，
P=0.026），且LncRNA AC000061.1与
CFTR mRNA呈正相关（
r=0.169，
P=0.039）。质粒转染NTERA-2细胞后，沉默Si-LncRNA组LncRNA AC000061.1 mRNA及
CFTR mRNA和蛋白表达均降低（
P=0.005，
P=0.003），过表达H-LncRNA组LncRNA AC000061.1 mRNA及
CFTR mRNA和蛋白表达均显著增高（
P=0.002，
P=0.009）。沉默Si-LncRNA组细胞增殖能力显著下降（
P=0.003），细胞凋亡率明显增高（
P=0.001）；过表达H-LncRNA组细胞增殖能力增加（
P=0.017），细胞凋亡率降低（
P=0.017）。
结论:NOA睾丸组织中LncRNA AC00006.1通过调控
CFTR基因表达引发细胞增殖与凋亡的异常，可能参与NOA的发病机制。

关键词：长链非编码RNA、CFTR基因 、非梗阻性无精子症、增殖、凋亡

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资助基金：国家自然科学基金8196277，81660257;宁夏自然科学基金2020AAC03381;宁夏回族自治区重点研究开发计划重大（重点）项目2019BFG02005;2016领军人才（宁夏）XY201807;宁夏医科大学校级项目8196277, 81660257;National Natural Science Foundation of China2020AAC03381;Ningxia Natural Science Foundation2019BFG02005;Major Key Project of the Key Research and Development Plan of Ningxia Hui Autonomous RegionXY201807;2016 Leading Talent Ningxia;School-level Project of Ningxia Medical University

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：822-831