慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染大鼠卵巢的实验研究
目的:探讨慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因体外转染卵巢颗粒细胞的有效性及在体转染大鼠卵巢组织的最佳剂量及时效性.方法:原代培养大鼠卵巢颗粒细胞,慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因(lenti-GFP)(MOI=20)体外转染颗粒细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达.通过显微注射方法将不同转染剂量低剂量(2× 106 TU病毒颗粒,A组;高剂量:10× 106 TU病毒颗粒,B组;空白病毒载体,C组;空白对照组,D组)的lenti-GFP在体转染大鼠卵巢组织.于转染第5日观察各剂量组卵巢组织切片的GFP表达情况,确定最佳转染剂量后,分别于转染第5日、第15日、第30日、第45日、第60日、第75日观察大鼠卵巢组织和全身其他组织器官GFP的表达.结果:体外转染实验中,在转染第5日可以观察到颗粒细胞内有GFP表达,并随着转染时间延长其表达量增多.体内转染大鼠卵巢第5日,不同剂量组大鼠卵巢均有明显GFP表达;A组与B组卵巢组织切片荧光强度分别为0.231±0.020及0.231±0.020;组间差异无统计学意义(P=0.976).以最佳转染剂量(2× 106 TU病毒颗粒)转染,随转染时间的延长,GFP的表达量增加,于转染第30日时表达量达到峰值,并可持续高效表达至第75日(转染第5日、第15日、第30日、第45日、第60日、第75日卵巢组织荧光强度值分别为0.231±0.020、0.312±0.021、0.346±0.020、0.357±0.013、0.350±0.013及0.351±0.017).同时,大鼠全身其它组织器官均有GFP的高效持续表达.结论:lenti-GFP不仅可以在体外有效转染颗粒细胞,并且可以通过活体转柒大鼠卵巢后,在卵巢及其他组织器官均高效持续地表达.
慢病毒载体、绿色荧光蛋白(GFP)、基因转染、颗粒细胞、卵巢、体外实验、大鼠
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R711.75;R711.51(妇产科学)
重庆市卫生局医学科研重点项目2011-1-003
2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
366-371
