结合多重链置换扩增和等位基因特异性PCR从单细胞中扩增脊髓性肌萎缩症运动神经元生存基因

摘要：

目的:建立结合多重链置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)全基因组扩增法和等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)对单细胞进行脊髓性肌萎缩(spinal muscular atrophy,SMA)诊断的方法.方法:对脊髓性肌萎缩症运动神经元生存基因(survival motor neuron gene 1,smn1)7号外显子纯合缺失皮肤成纤维细胞及正常的皮肤成纤维细胞使用MDA法进行全基因组扩增,使用AS-PCR检测扩增产物的smn1和smn2基因,同时扩增D5S435、D5S351这2个微卫星位点,评估扩增效率、等位基因脱扣(allele dropout,ADO)率及污染检测.结果:对18个SMA细胞和21个smn1基因正常的细胞进行扩增.smn1和smn2基因扩增成功率分别为90.4%(19/21)和94.8%(37/39).2个微卫星的扩增成功率为82.1%(32/39)和88.9%(16/18),ADO率分别为16.22%(6/37)和12.5%(2/16).总扩增成功率为88.89%(104/117),总ADO率为15.09%(8/53).结论:建立了结合MDA和等位基因特异性PCR对单个细胞进行smn1、smn2基因的扩增方法,为SMA单细胞植入前诊断奠定了基础.

关键词：重链置换扩增(MDA)、脊髓性肌萎缩(spinal muscular atrophy、SMA)、等位基因特异性PCR(allele-specific PCR、AS-PCR)

所属期刊栏目：30

分类号：R596(全身性疾病)

资助基金：国家自然科学基金项目30871378;广州市科技局重大项目2006Z1-E0021

在线出版日期：2010-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：367-374,407