hCGβ-(CTP)4和hCGβ-(CTP)4-(C3d-P28)4在大肠杆菌中的表达及纯化

摘要：

目的:在大肠杆菌BL21(DE3)中表达hCGβ-(CTP)4、hCGβ-(CTP)4-(C3d-P28)4融合蛋白,并对蛋白进行分离纯化.方法:将Pbsmr-(CTP)4中的(CTP)4基因片断克隆入表达载体Pet-28a(+),得到表达质粒Pet-28a(+)-(CTP)4.将PCR获得的补体C3d-P28 DNA序列以头尾串连的方式构建四聚体.将(C3d-P28)4基因片断克隆入Pbsmr-(CTP)4,得到Pbsmr-(CTP)4-(C3d-P28)4,进一步得到表达质粒Pet-28a(+)-(CTP)4-(C3d-P28)4.将表达质粒Pet-28a(+)-(CTP)4和pET-28a(+)-(CTP)4-(C3d-P28)4分别转化入大肠杆菌BL21(DE3),表达融合蛋白hCCβ-(CTP)4和hCGβ-(CTP)4-(C3d-P28)4.采用Ni-NTA-resin和凝胶过滤方法纯化蛋白.结果:菌株经IPTG诱导后检测到目的基因的表达产物,SDS-PAGE和Western blot结果显示融合蛋白的分子量分别为27 kD和40 kD左右.结论:在BL21(DE3)中成功表达了hCGβ-(CTP)4和hCGβ-(CTP)4-(C3d-P28)4融合蛋白,并确立了纯化方法,为进一步研究其免疫原性和应用于抗肿瘤疫苗奠定了基础.

关键词：hCGβ-CTP多聚体、C3d、分子佐剂、表达、纯化

所属期刊栏目：27

分类号：Q81(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金30472087;上海市科技攻关项目05DZ19314

在线出版日期：2007-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：241-246,279