金槐ISSR-PCR反应体系的优化和引物筛选

摘要：

目的 优化和建立稳定的金槐ISSR-PCR反应体系并筛选出稳定的ISSR-PCR引物.方法 采用L16(45)正交设计方法,以dNTP、Tap酶、ISSR引物、Mg2+浓度和模版DNA 5个影响因素进行4水平优化试验,并对反应体系进行验证;采用优化所得的最佳反应体系进行引物筛选.结果 确立了金槐的最佳ISSR-PCR反应体系:即在25μl总体积反应体系中包含10×Buffer2.5μl,MgCl2 2.5mmol·L-1,ISSR引物0.6μmol·L-1,dNTPs0.25mmol·L-1,Taq酶1.0U,模板DNA约50ng.通过最佳体系进行引物筛选,获得11条适宜金槐扩增的ISSR引物.结论 经过12份金槐样品的验证,证明所建立的体系稳定可靠,可用于金槐遗传多样性、指纹图谱和标记辅助育种等方面的研究.

关键词：金槐、ISSP-PCR、正交设计、引物筛选

所属期刊栏目：28

分类号：R285.5(中药学)

资助基金：广西壮族自治区科技攻关计划;广西植物功能物质研究与利用重点实验室主任基金;广西科学院基本科研业务费专项

在线出版日期：2018-01-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：2747-2749