连翘抑制酪氨酸酶活性体外实验反应体系研究

摘要：

目的 研究连翘抑制酪氨酸酶活性实验在微孔板检测系统中适宜的反应体系.方法 以连翘两个极性部位的萃取物为受试对象,将反应总体积定为200μl,保持底物L-酪氨酸的体积40μl不变,依次变化酪氨酸酶和溶剂二甲亚砜的体积,在37℃环境下每2 min检测一次吸光度A475,持续40 min,以不含药时吸光度的变化值或含药时的酪氨酸酶活性抑制率作为参考指标,从酶体积、二甲亚砜体积及孵育时间等变化因素分析此实验适宜的反应体系.结果 ①吸光度值随着酶体积的增加而增高.酶体积为70μl时,吸光度值最高.不同酶体积的反应体系分别在20～26 min之间出现最大吸光度变化速率.②吸光度值随着二甲亚砜体积增加而增高.二甲亚砜终体积分数为5％时,样品溶解程度和线性关系均较2％时好.结论 此实验适宜的反应体系为:底物L-酪氨酸40μl,酶体积70μl或以下,加入适量pH6.8缓冲液和受试药物,使二甲亚砜的终体积分数为5％,体系总体积为200μl,恒温37℃下孵育20～26 min之后检测.此反应体系为下一步研究连翘抑制酪氨酸酶活性实验提供基础,也为其他药物的同类实验提供方法学参考.

关键词：连翘、酪氨酸酶抑制、反应体系

所属期刊栏目：22

分类号：R963(药理学)

资助基金：国家自然科学基金30973960

在线出版日期：2012-03-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：2580-2582