达拉菲尼对小鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

摘要：

目的:探讨达拉菲尼对小鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用及机制. 方法:将24只C57BL/6小鼠随机分为4组:假手术组(sham组);缺血再灌注组(IRI组),夹闭双侧肾蒂30 min再灌注24h;达拉菲尼组(DAB组),仅与IRI组在相同时间灌胃给予相同量的达拉菲尼;达拉菲尼预处理+缺血再灌注组(DAB+IRI组),灌胃给予达拉菲尼2h后进行IRI造模,每组6只.收集小鼠IRI 24h后的血清及肾脏组织.采用相应试剂盒检测各组肾功能血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)水平,HE及PAS染色比较各组肾脏病理学改变,Western Blot及qRT-PCR检测肾小管损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子1(KIM-1)的蛋白及mRNA水平,qRT-PCR检测炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平,免疫组织化学染色检测肾脏组织中TNF-α蛋白表达,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测肾组织细胞死亡情况,Western Blot检测肾脏组织中程序性坏死(necroptosis)通路相关的受体相互作用蛋白1(RIP1)、受体相互作用蛋白3(RIP3)、磷酸化的受体相互作用蛋白3(pRIP3)、混合系列蛋白激酶复合物(MLKL)、磷酸化的混合系列蛋白激酶复合物(pMLKL)蛋白水平. 结果:与sham组相比,IRI组SCr、BUN水平升高(P＜0.05),肾组织病理损伤严重,小管损伤标志物NGAL和KIM-1蛋白和mRNA水平升高,炎症因子IL-6以及TNF-α mRNA含量增加,肾脏组织TNF-α蛋白表达升高,肾脏组织细胞死亡增多,RIP1、RIP3、pRIP3、MLKL以及pMLKL蛋白表达增加;与IRI组比较,DAB+IRI组减轻肾功能、肾组织损伤,减少NGAL、KIM-1的蛋白和mRNA表达水平,下调IL-6和TNF-αmRNA水平,减少肾脏组织中TNF-α蛋白表达,抑制RIP3、pRIP3及pMLKL的蛋白表达(P均＜0.05),而RIP1和MLKL蛋白改变不明显.DAB组与sham组间各指标无统计学差异. 结论:达拉菲尼通过抑制RIP3介导的程序性坏死从而对小鼠肾脏缺血再灌注损伤起保护作用.

关键词：达拉菲尼、肾脏缺血再灌注损伤、程序性坏死、受体相互作用蛋白3

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资助基金：上海市科学技术委员会基金资助项目14411963300

在线出版日期：2019-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：139-144