继发性甲状旁腺功能亢进患者血清对内皮细胞的影响及Klotho蛋白的保护作用
目的:观察继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT)患者血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增生、凋亡、一氧化氮(NO)合成的影响,并探讨Klotho蛋白的保护作用及机制. 方法:分别收集15例健康人、10例不伴SHPT的CKD 5期患者、15例SHPT拟手术治疗的患者混合血清,体外培养HUVEC.以健康人血清为正常对照,观察SHPT患者血清、不伴SHPT的CKD5期患者血清处理细胞24h后对细胞增生的影响(CCK-8),观察不同浓度、不同时间SHPT血清对HUVEC增生的影响.在10％ SHPT血清环境下,以不同浓度Klotho蛋白干预24h,检测HUVEC增生、凋亡(流式细胞术)、NO合成(硝酸盐还原法).加/不加PD98059[细胞外调节蛋白激酶(ERK) 1/2抑制剂],检测总ERK(t-ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)(Western印迹法检测). 结果:不伴SHPT的CKD 5期患者血清和SHPT患者血清均可抑制细胞增生,且SHPT血清对于细胞增生的抑制作用较不伴SHPT的CKD5期患者血清显著(P＜0.05).在一定浓度范围内(5％～20％),随着SHPT血清浓度增加,细胞增生受抑制(P＜0.05),呈现浓度依赖性.10％ SHPT血清处理细胞6h、12h、24h,随着处理时间延长,细胞增生受抑制(P＜0.05),呈现时间依赖性.50～ 100 ng/ml Klotho蛋白干预可部分恢复10％ SHPT血清处理后HUVEC的增生活力(P＜0.05)、抑制其凋亡,并上调p-ERK表达,且可被PD98059阻断.SHPT血清作用下,HUVEC中NO合成减少(P＜0.05),Klotho蛋白干预可促进NO合成(P＜0.05). 结论:SHPT血清抑制HUVEC增生和NO合成.Klotho蛋白可部分拮抗SHPT血清对HUVEC增生的抑制作用,并促进NO合成,其促进HUVEC增生的机制可能与其抗凋亡作用及上调p-ERK有关.
继发性甲状旁腺功能亢进、人脐静脉内皮细胞、Klotho蛋白、凋亡、外调节蛋白激酶、一氧化氮
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R19;R73
江苏省卫生厅项目Z201002
2014-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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