蛋白酶体抑制剂抑制肾间质成纤维细胞细胞外基质表达及其机制

摘要：

目的:本研究旨在观察蛋白酶体抑制剂MG132对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激下的大鼠肾间质成纤维细胞的细胞外基质表达的影响并初步探讨其机制. 方法:体外培养大鼠肾间质成纤维细胞(NRK/49F),利用实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR)分别观察MG132不同浓度直接刺激细胞和对TGF-β1(5 ng/ml)诱导下产生的结缔组织生长因子(CTGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连结蛋白(FN)和Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)mRNA表达的影响.应用相同浓度的MG132(2.5 μmol/L)预处理后,再加以TGF-β1分别刺激不同时间(0 h,6 h,12 h,24 h),同样用Realtime PCR检测上述因子的mRNA水平.利用Western blot观察MG132对TGF-β1诱导的FN和Smads蛋白表达的影响.ELISA方法观察MG132对TGF-β1诱导的FN蛋白分泌的影响. 结果:MG132直接作用NRK/49F细胞即可明显降低CTGF、α-SMA和FN、Col Ⅲ的mRNA表达水平,随着MG132浓度(0.5、1、2.5、5 μmol/L)增大,CTGF的mRNA表达均下降,分别为对照组的65%、46%、17%和20%;α-SMA的mRNA表达均下降,分别为对照组的10%、7%、4%和3%;FN的mRNA表达均下降,分别为对照组的54%、42%、25%和24%;ColⅢ的mRNA表达均下降,分别为对照组的30%、12%、5%和1%(均为P<0.05).5 ng/ml TGF-β1分别使CTGF、α-SMA和FN、Col Ⅲ mRNA表达增加为对照组的6.91、2.11、1.38和3.60倍(P<0.05),用MG132不同浓度(0.5、1、2.5、5 μmoL/L)预处理后,CTGF mRNA均下降,分别为对照组的3.30、2.84、1.06和0.74倍,α-SMA mRNA均下降,分别为对照组的0.50、0.31、0.28和0.19倍,FN mRNA均下降,分别为对照组的0.80、0.67、0.55和0.37倍,Col Ⅲ mRNA均下降,分别为对照组的0.57、0.35、0.28和0.05倍.MG132在各时间点均能使TGF-β1所引起的纤维化相关因子的mRNA表达水平下调.5 ng/ml TGF-β1以时间依赖方式诱导p-Smad 2、p-Smad 3磷酸化增加,1 h达到高峰.MG132预处理组p-Smad 2、p-Smad 3及FN蛋白表达量与TGF-β1刺激组相比显著下降,各组Smad 2/3蛋白表达无显著变化.MG132预处理组FN蛋白分泌鼍与TGF-β1刺激组相比显著下降. 结论:MG132可下调肾间质成纤维细胞的纤维化相关因子的mRNA表达,它能够通过抑制Smad信号转导途径抑制TGF-β1介导的炎症反应,提示MG132在肾脏炎症中具有抑制间质纤维化的潜在作用.

关键词：蛋白酶体抑制剂、转化生长因子β、细胞外基质、Smad

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分类号：R69;R73

资助基金：国家自然科学基金资助项目30270613,30771000;上海市重点学科T0201;上海市卫生局重点学科基金05Ⅲ001;上海市卫生局重点课题2003ZD002

在线出版日期：2009-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：439-445