人MeCP2基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

摘要：

目的 构建针对人甲基化结合蛋白MeCP2的shRNA真核表达质粒,稳定转染肺腺癌细胞A-549观察其对MeCP2表达的影响.方法 根据MeCP2的mRNA序列,利用Ambion网上设计软件设计两条针对该基因不同靶点的shRNA干扰序列,克隆到线性化的质粒载体上,PCR、测序鉴定插入成功,且插入方向正确.转染A-549细胞,观察其在mRNA和蛋白水平对MeCP2的影响.结果 成功构建两个MeCP2的shRNA真核表达质粒,并稳定转染到肺癌细胞A-549中,两个真核表达质粒在mRNA水平和蛋白水平对MeCP2有明显的抑制作用.结论 人MeCP2的shRNA真核表达质粒成功构建及鉴定为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.

关键词：肺肿瘤/遗传学、基因表达、质粒、克隆、分子、肿瘤细胞、培养的

所属期刊栏目：23

分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：江西省科学技术厅社会发展攻关项目20041095

在线出版日期：2008-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：229-233