转录hTERT基因shRNA的溶瘤腺病毒的构建及抗肿瘤效应

摘要：

目的 构建转录端粒酶逆转录酶(hTERT)基因小发夹RNA(hTERT-shRNA)的条件增殖腺病毒.方法 设计能转录hTERT-shRNA的模板DNA序列,煺火后克隆至pCA13质粒,构建重组质粒pCA13-hTERT.用Bg1Ⅱ从pCA13-hTERT酶切出包含CMV启动子及hTERT-shRNA模板的表达框,将表达框克隆入条件增殖腺病毒质粒pZD55,构建重组质粒pZD55-hTERT.将pZD55-hTERT与腺病毒右臂质粒pBHGE3共转染293细胞,9～12天后出现病毒空斑.提取重组腺病毒的DNA,PCR鉴定正确者即为条件增殖腺病毒ZD55-hTERT.大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,测滴度.感染人肝癌细胞株(BEL-7404),通过荧光显微镜、结晶紫染色法观察细胞病作用,MTT法检测细胞存活情况.结果 酶切分析、测序鉴定表明pCA13-hTERT构建成功;PCR、酶切分析、测序鉴定表明pZD55-hTERT构建成功;PCR鉴定表明ZD55-hTERT包含目的基因且无野生型腺病毒的污染;ZD55-hTERT滴度为1×1011PFU/ml;ZD55-hTERT在肝癌细胞株BEL-7404中可导致明显细胞病变效应.结论 成功构建的ZD55-hTERT为利用hTERT-shRNA靶向肿瘤治疗奠定了基础.

关键词：肿瘤、腺病毒、人、RNA、端粒、逆转录酶、聚合酶链反应、基因

所属期刊栏目：22

分类号：R73-3(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30570385;江苏省青年创新人才资助课题BK2005429

在线出版日期：2007-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：12-17