抑癌基因DKK2抑制儿童肾母细胞瘤细胞增殖的机制研究

摘要：

目的 探讨WNT信号通路调控因子DKK2在儿童肾母细胞瘤细胞和组织中的表达,及对儿童肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1增殖的影响,并初步探讨其作用机制.方法 通过RT-PCR、qRT-PCR和免疫蛋白印迹实验分析DKK2在儿童肾母细胞瘤细胞系和组织中的相对表达;将DKK2过表达的SK-NEP-1细胞设定为实验组(DKK2组),空白对照质粒组设定为对照组(Vector组),分别转染pcDNA3. 1( +) -Flag-DKK2质粒(实验组)和pcDNA3. 1( +) -Flag-Vector质粒(对照组)至SK-NEP-1细胞系,RT-PCR和免疫蛋白印迹实验验证DKK2的过表达;通过CCK-8实验和细胞克隆实验分析DKK2对细胞增殖的影响;流式细胞周期和凋亡实验验证DKK2 过表达对细胞增殖的作用机制;裸鼠成瘤实验验证DKK2体外对细胞增殖的影响;通过qRT-PCR、WB及免疫组化分析DKK2对细胞增殖抑制的作用机制.结果 与正常肾上皮组织相比,DKK2 mRNA在儿童肾母细胞瘤细胞和组织中的中表达明显下调,差异具有统计学意义( P<0. 001);与对照组相比(100% ),转染后24、48、72 h实验组细胞活性受到明显的抑制( P<0. 05),同时实验组细胞克隆形成明显受到抑制(31. 11 ± 2. 14)% (P<0. 05);流式细胞实验发现,与对照组相比,实验组细胞明显阻滞于G1 期(P<0. 001),实验组中细胞凋亡率明显升高(P<0. 001);与对照组相比,过表达DKK2后裸鼠肿瘤和体积大小明显降低( P<0. 001);过表达DKK2后, active-β-catenin及下游的基因受到了明显抑制.结论 DKK2在人皮肤肾母细胞瘤组织中表达下调,可能通过拮抗Wnt/β-catenin信号通路参与肾母细胞瘤的机制.

关键词：儿童肾母细胞瘤、DKK2、抑癌基因、细胞增殖、Wnt/β-catenin

所属期刊栏目：33

分类号：R737(肿瘤学)

在线出版日期：2019-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：14-20