pIRES2-EGFP/Cbfal真核双表达载体的构建及鉴定

摘要：

目的:构建成骨细胞特异性转录因子Cbfal双表达载体,以期用于成骨的体内、外研究.方法:以含有全长cDNA的pCMV/Cbfal为模板,PCR扩增Cbfal,T-A克隆,酶切亚克隆到pIRES2-EGFP载体上,酶切、PCR及测序鉴定正确后命名为pIRES2-EGFP,脂质体转染NIH3T3细胞,G418筛选稳定表达后,提取细胞的总蛋白,Western blot检测Cbfal蛋白的表达,以未转染组为对照.结果:酶切、PCR及测序证实pIRES2-EGFP/Cbhl载体序列正确,脂质体法转染NIH3T3细胞后可见绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测到Cbfal在蛋白水平的表达.结论:pIRES2-EGFP/Cbfal栽体构建成功,可为后续研究奠定基础.

关键词：成骨细胞、核心结合因子、pIRES2-EGFP、基因治疗

所属期刊栏目：24

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2008-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：704-706