解旋酶依赖性等温扩增快速检测O157:H7及其毒力基因的研究

摘要：

目的 建立一种快速、特异的检测大肠杆菌O157∶H7及其毒力基因的解旋酶依赖性等温扩增法(HDA). 方法 以大肠杆菌O157∶H7的溶血素基因(hly)、粘附抹平因子(eae)和O抗原编码基因(rfb)为扩增对象,设计3对特异性HDA引物,通过优化条件后进行灵敏度和特异度试验,并与普通PCR法比较. 结果 HDA法从标准菌株和实验室分离株中均扩增出hlyA、eaeA和rfb基因片段,产物大小分别为100、93和109 bp,而其他非大肠杆菌O157∶H7的扩增结果均为阴性.通过对各梯度大肠杆菌O157∶H7菌悬液的检测表明HDA法可以检测的最低菌液浓度为3.0×101 cfu/ml,该法与普通PCR法灵敏度相当. 结论 本HDA法具有较高的灵敏度和特异度,可快速、高效地检出大肠杆菌O157∶ H7菌和其毒力基因,而且对试验仪器要求低,特别适合应急处置现场和基层检验机构作为临床大肠杆菌O157∶ H7感染的辅助诊断.

关键词：解旋酶依赖性等温扩增、大肠杆菌O157∶H7、hlyA基因、eaeA基因、rfb基因

所属期刊栏目：21

分类号：R378.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：湖南省科学技术厅项目2012FJ3064

在线出版日期：2014-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：288-290