PCR法制备地高辛标记探针原位杂交在人结核杆菌Edman株基因检测中的应用

摘要：

目的 建立一种用于临床上检测人感染结核杆菌Edman株的快速敏感的PCR探针原位杂交方法.方法 根据NCBI报道的人结核杆菌编码序列,以结核杆菌Edman株Ag85A基因150~841 bp之间的基因序列为靶序列,采用PCR法制备对人结核杆菌特异性高的地高辛标记DNA探针(690 bp),并对探针进行电泳和测序鉴定.分离培养结核杆菌,通过原位杂交检测所制备探针的特异性;对结核杆菌做10倍比稀释,运用探针对其进行敏感性检测.结果 所制备的探针对结核杆菌的杂交反应呈阳性,以dNTP代替地高辛标记探针作为对照组的杂交反应为阴性;通过基因序列测定证实了PCR产物的特异性;PCR法制备地高辛标记探针原位杂交法检测结核杆菌A_g85A基因下限为1.0 x 10.c妯ml. 结论 本研究建立的地高辛标记探针原位杂交法对结核杆菌Edman株Ag85A基因的检测具有快速、特异、敏感白勺特点,适合结核分枝杆菌的临床检测.

关键词：结核分枝杆菌、Ag85A、PCR、地高辛标记探针、原位杂交

所属期刊栏目：16

分类号：R-331(医学研究方法)

在线出版日期：2011-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：913-915