日本血吸虫pcDNA3.1(+)-SjPGK重组质粒的构建及鉴定

摘要：

目的构建日本血吸虫中国大陆株磷酸甘油酸激酶基因片段(SjPGK)的真核表达重组质粒,寻找新的预防日本血吸虫病的候选疫苗分子.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从日本血吸虫总RNA中体外扩增SjPGK基因片段;克隆入pMD18-T载体中,然后挑取阳性克隆经双酶切分析、PCR鉴定;亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,阳性克隆经鉴定后进行脱氧核糖核酸序列测定;运用Blast程序,将测序结果及其推导的编码氨基酸序列与NCBI数据库在核苷酸水平和氨基酸水平进行同源性比较. 结果RT-PCR特异性扩增出一条长约830 bp大小的条带;重组质粒pMD18-T-SjPGK和pcDNA3.1(+)-SjPGK经双酶切和以质粒为模板进行PCR扩增,均可获得一条与RT-PCR产物一致的DNA片段;脱氧核糖核酸序列测定和分析结果表明:SjPGK基因片段长为830 bp,与SmPGK的核苷酸同源性为85%,分值为672;氨基酸同源性为94%,分值为473. 结论成功地构建pcDNA3.1(+)-SjPGK重组质粒,为构建其核酸疫苗提供了条件.

关键词：日本血吸虫、磷酸甘油酸激酶、基因克隆、序列测定

所属期刊栏目：11

分类号：R383.24(医学寄生虫学)

资助基金：湖南省教育厅科研项目02C392

在线出版日期：2005-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1092-1094